2021年中考生物知識點之：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數

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　　土壤中分解尿素的細菌的分離與計數

　　尿素      是一種重要的農業氮肥，尿素并不能直接被農作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為他們能合成脲酶

　　尿素最初是從人的尿液中發現的

　　篩選菌株

　　（1）實驗室中微生物的篩選應用的原理

　　人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。

　　（2）選擇性培養基

　　在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基，稱作選擇培養基。

　　（3）配制選擇培養基的依據

　　根據選擇培養的菌種的生理代謝特點加入某種物質以達到選擇的目的。例如，培養基中不加入有機物可以選擇培養自養微生物；培養基中不加入氮元素，可以選擇培養能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養金黃色葡萄球菌等。

　　統計菌落數目

　　（1）測定微生物數量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數。

　　（2）稀釋涂布平板法統計樣品中活菌的數目的原理

　　當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結果準確，一般設置3～5個平板，選擇菌落數在30～300的平板進行計數，并取平均值。統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，因此，統計結果一般用菌落數而不是活菌數來表示。

　　采用此方法的注意事項：1.一般選取菌落數在30~300之間的平板進行計數

　　2.為了防止菌落蔓延，影響計數，可在培養基中加入TTC（在計數瓊脂中加入適量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML瓊脂中),細菌菌落長成紅顏色,對去除食品本底顆粒物干擾非常有意義）.

　　3.本法僅限于形成菌落的微生物

　　設置對照

　　設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，其作用是比照試驗組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實是所測試的條件引起相應的結果。

　　實驗設計

　　實驗設計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。

　　（1）土壤取樣：同其他生物環境相比，土壤中的微生物，數量最大，種類最多。在富含有機質的土壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機物、潮濕、pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。

　　（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數目。在實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養，以保證獲得菌落數在30~300之間、適于計數的平板。

　　測定土壤中細菌的數量，一般選用104  105   106

　　測定放線菌的數量，一般選用103  104   105

　　測定真菌的數量，一般選用102  103    104

　　（3）微生物的培養與觀察

　　不同種類的微生物，往往需要不同的培養溫度和培養時間。細菌30~37℃ 1~2天

　　放線菌25~28℃ 5~7天 霉菌25~28℃ 3~4天

　　每隔24小時統計一次菌落數目，選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間不足而導致一樓菌落的數目。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色

　　疑難解答

　　（1）如何從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數？

　　統計某一稀釋度下平板上的菌落數，最好能統計3個平板，計算出平板菌落數的平均值

　　每克樣品中的菌落數=（C/V）*M 其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數

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